René van ‘t Hof richtte in 1989 samen met Beppie Melissen en Leny Breederveld theatergroep Carver op, waaraan hij lange tijd verbonden was. Met dit succesvolle gezelschap maakte hij tot en met 2004 voorstellingen. René speelde bij gezelschappen als Onafhankelijk Toneel, het Ro Theater en Kassys. In 2007 ontving hij de VSCD Mimeprijs voor zijn rol in het toneelstuk Vallende Ster van Bernlef door Onafhankelijk Toneel. Vanaf 2014 speelde hij bij Theater Artemis de succesvolle kleutervoorstelling De man die alles weet. In 2015 was hij te zien in Terug naar Toen van DelaMar Producties. Op dit moment toert hij samen met René Groothof met De nazi en de kapper.
Bij het grote publiek werd René voornamelijk bekend door zijn rol van Kees Flodder in de films Flodder en Flodder in Amerika! van Dick Maas. Daarnaast was hij in veel Nederlandse films te zien, waaronder Pietje Bell (2002), Erik of het klein insectenboek (2004), Alles is Liefde (2007), De gelukkige huisvrouw (2010), Alles is Familie (2012) en Matterhorn (2013).
Op televisie acteerde René onder andere in Jiskefet (1990 – 2004), Grijpstra & De Gier (2005) en Van Speijk (2006).
Deel 2 van The Family is zijn eerste optreden bij Theater Utrecht.